产品货号:
CZ009
中文名称:
肝素磁珠
英文名称:
BalBeads Magshow Heparin Magbeads
产品规格:
5ml|2×50ml|4×250ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
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肝素磁珠具有快速的磁响应性、丰富的肝素密度、极高的物理化学稳定性等特点。一方面,可作为亲和层析的配基,能够与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ等生物分子发生特异性结合;另一方面,由于表面带有大量负电性硫酸根离子基团,可作为一种阳离子交换介质,在一定pH条件下,与带正电的蛋白具有强的结合能力。
与传统柱层析纯化方式相比,肝素磁珠无需对粗蛋白样品进行预处理(如:反复繁琐的离心,费时费力的过滤操作),此外,无需控制流速及柱压,不需要昂贵的层析设备。对于熟练的操作者来说,在很短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取,且能轻松实现多个样品的平行处理,实现高通量的蛋白纯化。
肝素磁珠适用于抗凝血因子III、凝血因子、核酸结合蛋白、脂蛋白、干扰素、类固醇受体、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。
- 丰富的结合位点,加强了与配体的特异性结合。
- 磁响应速度快,减少操作时间。
- 磁珠具有良好的分散性和重悬性,提高操作的便捷性。
- 配基具有良好的物理化学稳定性,提高了实验结果的可靠性及可重复性。
磁珠粒径范围 | 30~150μm |
表面基团含量 | ~3mg Heparin/mL Gel |
蛋白结合量 | 1 2~3mg抗凝血酶III/mL Gel |
保存液 | 20%乙醇 |
悬液浓度 | 2 10%(V/V)磁珠悬液 |
保存温度 | 2~30℃ (长期保存,建议置于2~8℃) |
Binding Buffer | 50mM Tris-HCl,pH8.0 |
Elution Buffer | 50mM Tris-HCl,1~2M NaCl,pH8.0 |
- 蛋白结合量与目标蛋白特性相关,此处仅作参考值;
- 1mL磁珠悬液中含有100μL磁珠。
组分 | 5mL | 2×50mL | 4×250mL |
肝素磁珠 | 5mL | 2×50mL | 4×250mL |
说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期2年。
图1.肝素磁珠纯化核酸相关蛋白SDS-PAGE图谱(两步纯化法)。通过图1显示:肝素磁珠可特异性的结合核酸相关蛋白,配合DEAE离子交换层析,可以获得高纯度目标蛋白(泳道8),且纯化回收率较高,明显高于采用热处理获得的核酸相关蛋白(泳道4)。
- 本制品不宜冷冻、干燥或离心操作。冷冻、干燥和离心等操作会引起磁珠团聚,不易于重悬和分散,并且影响磁珠表面功能基团的化学活性。
- 在使用本制品前,请务必充分振荡或超声使磁珠保持均匀的悬浮状态。
- 使用过程中可根据需求,用纯化水或缓冲液磁吸洗涤磁珠2~3次,以去除保存液中乙醇。
- 本制品需与磁性分离设备配套使用。
- 盐浓度与pH值均会影响特异性蛋白的结合与洗脱,客户需自行摸索不同蛋白的结合和洗脱条件,以保证蛋白纯化量和纯度。
以下用法是以纯化人血浆中抗凝血酶III为例:
- 样品处理:取人血浆1mL加入至1.5mL EP管中,接着加入500μL Binding Buffer,充分混匀。
- 磁珠预处理:将肝素磁珠漩涡振荡30 s,使磁珠充分重悬;取1mL 10%(V/V)磁珠悬液置于另一新的1.5mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液,用1mL Binding Buffer洗涤2次,磁性分离,管中磁珠可直接用于抗体分离。
- 蛋白吸附:在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下(约25℃)将EP管置于垂直混合仪混匀15~30min,使样品和磁珠充分接触并吸附,然后进行磁性分离,移弃上清液。
- 磁珠洗涤:向EP管中加入1mL Binding Buffer,漩涡振荡重悬磁珠1min后进行磁性分离,移弃上清液;该操作重复3次。
- 根据对洗脱蛋白SDS-PAGE图谱,在Binding Buffer中可适当加入一定浓度NaCl,该步骤可有效的去除非特异性吸附蛋白,使操作者获得更高浓度的目标蛋白。
- 蛋白洗脱:在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.2mL Elution Buffer,用移液器吹打或者涡旋振荡下迅速重悬,然后在室温下(约25℃)将EP管置于垂直混合仪混匀10~15min后进行磁性分离,收集上清液至新的EP管。
- 磁珠再生:向EP管中加入1mL纯化水,漩涡振荡重悬磁珠后进行磁性分离,移弃上清液,重复操作3次;接着改用Binding Buffer洗涤磁珠3次。磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议进行在位清洗(CIP)。
- 在位清洗(CIP):依次采用0.1M NaOH、8M尿素、纯化水、Binding Bufdfer洗涤磁珠2次;最后加入1mL Storage Buffer(20%乙醇)重悬磁珠,置于2~8℃保存。
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